Dieses Kit eignet sich für die Quantität von Schweine trypsin in nach geschalteten Reinigungs prozessen von biologischen Produkten, die in der Lage sind, allgemein verfügbare rekombinante Schweine trypsin und Trypsin aus Schweine pankreas zu identifizieren.
Schweine trypsin, eine Serin protease, spaltet spezifisch Peptid bindungen am C-Terminal von Lysin und Arginin. Es wird haupt sächlich zur Herstellung von rekombinantem Insulin, zur Aktivierung von Virus partikeln und zur Zell verarbeitung in Impfstoff herstellungs prozessen verwendet.
Dieses Kit basiert auf dem Festphasen-Enzym-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) mit einer Doppelantikörper-Sandwich-Technik zum Nachweis von Trypsin resten in den Proben. Ein für Trypsin spezifischer polyklonaler Schaf antikörper wurde im Assay verwendet, um verbleibendes Trypsin in den Proben einzufangen. Sowohl Kalibrierung standards als auch Test proben wurden der Mikro titer platte zugesetzt, die mit Einfang antikörper vor beschichtet war. Nach dem Auswaschen ungebundener Proteine wurden der Nachweis antikörper und der biotin konjugierte Anti-Trypsin-Antikörper in das Bohrloch gegeben, um den Komplex zu bilden. Nach Inkubation und Waschen wird das konjugierte Strept avidin(Streptavidin-HRP) mit Meerrettich peroxidase zugesetzt. Nach einem weiteren Inkubations-und Wasch schritt wurde TMB-Substrat (3,3 ',5,5'-Tetra methyl benzi din) zur Reaktion hinzugefügt, HRP katalysierte die Oxidation von TMB durch H2O2Um ein blaues Produkt zu erzeugen (maximaler Absorptions peak bei 655 nm). Dann wurde die Stop-Lösung hinzugefügt, um die enzymatische Reaktion zu beenden, was zu einem gelb gefärbten Produkt führte (maximaler Absorptions peak bei 450 nm). Die Absorptions werte bei 450 nm Wellenlänge korrelierten positiv mit der Trypsin-Konzentration in den Kalibrierung standards und den Proben. Die Konzentration von Trypsin in den Proben kann unter Verwendung einer Dosis-Wirkungs-Kurve berechnet werden.
| Komponenten | Versand zustand | Größe der Einheit | Nachweis methode |
| Trypsin Kalibrierung Standard | 2-8 ° c | 96 Tests | Sandwich ELISA |
| Anti-Trypsin-Mikro titer streifen | |||
| Rekonstitution lösung | |||
| Wasch puffer Konzentrat (10 ×) | |||
| Anti-Trypsin:Biotin (100 ×) | |||
| Streptavidin-HRP (100 ×) | |||
| TMB-Substrat | |||
| Stop-Lösung | |||
| Versiegelung folie |
| Linearität & Reichweite | 0, 04-2, 56 ng/mL, R2> 0,990 |
| Genauigkeit | Wieder findungsrate = 85,7%-111,0% |
| LLOQ | 0,04 ng/mL |
| ULOQ | 2,56 ng/mL |
| Nachweis grenze | 0,0144 ng/mL |
| Wiederholbar keit | 4,1%-7,7% (CV≤ 20%) |
| Spezifität | Keine Kreuz reaktivität mit üblicher weise Protein analoga (e.g., ov albumin und BSA von zwei verschiedenen Herstellern), gemeinsame technische Zelllinien und technisches Bakterien protein (e.g., MDCK, CHO, Vero, 293T, E.coli und P.pastoris) |
| Robustheit | Inkubate bei 25 ° C ± 5 ° C, CV≤ 20% |
| Instrumenten tauglichkeit, nicht beschränkt auf Thermo Multis kan FC, Bio-Tek Synergy2 |
SHENTEK®DNA-Proben vorbereitung skit für Rest wirts zellen
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