Haupt methoden der RCR-Prüfung

Was ist RCR-Test?

RCR-Tests beziehen sich auf eine Reihe von Methoden, die bei der Herstellung von CAR-T zelltherapie produkten verwendet werden, um das Vorhanden sein von Replikation kompetentem Retro virus (RCR) oder Replikation kompetentem Lenti virus (RCL) nachzuweisen. Da diese replikation kompetenten Viren (RCV) durch revert ive Mutationen von Virus vektoren entstehen können und Replikation fähigkeiten besitzen, stellen sie möglicher weise ein Sicherheits risiko für Patienten dar. Der Zweck vonRCR-PrüfungIst, um die Sicherheit von CAR-T produkten zu gewährleisten und RCV-Kontamination zu verhindern.

Haupt methoden der RCR-Prüfung

Indikator Zell kultivierung methode

Bei dieser Methode wird die Probe mit Indikator zellen zusammen kultiviert und auf zytopathische Effekte (CPE) oder Anzeichen einer Virus replikation beobachtet. Diese Methode kann das Vorhanden sein von RCR visuell erkennen, ist jedoch zeit aufwändig.

ELISA-Methode (p24 Protein Assay)

Diese Methode bestimmt das Vorhanden sein einer RCR-Kontamination durch Nachweis des Vorhanden seins des viralen Kern proteins p24. Das p24-Protein ist ein Kern protein von Retro viren und Lenti viren, und sein Vorhanden sein weist im Allgemeinen auf das Vorhanden sein von Virus partikeln hin.

PCR/qPCR-Methode

Diese Methode verwendet spezifische Primer, um bestimmte Regionen im viralen Genom (wie das psi-Gag oder VSV-G Gene) unter Verwendung der Polymerase ketten reaktion (PCR) oder der quantitativen PCR (qPCR) zu amplifi zieren. Technologie, um das Vorhanden sein von RCR zu erkennen. Aufgrund seiner kurzen Detektion szeit, hohen Empfindlichkeit und starken Reproduzier barkeit wird die qPCR-Methode häufig für die schnelle Freisetzung von CAR-T produkten verwendet.

Reverse Transkript ase Activity Assay (PERT)

Diese Methode bestimmt das Vorhanden sein von RCR durch Nachweis der Aktivität der reversen Transkript ase. Reverse Transkript ase ist ein Enzym, das für die Replikation von Retro viren und Lenti viren essentiell ist, und seine Aktivität kann als Marker für die Virus replikation dienen.

Unter diesen Methoden wird die qPCR-Methode von vielen CAR-T anwendungs unternehmen aufgrund ihrer Effizienz und Empfindlichkeit bevorzugt. Mit der qPCR-Methode können RCR-Testergebnisse in relativ kurzer Zeit erzielt werden, um die Sicherheit und Qualität CAR-T Produkte zu gewährleisten.

Im Allgemeinen sind RCR-Tests ein unverzicht barer Bestandteil des Produktions prozesses für CAR-T Zelltherapie produkte, um sicher zustellen, dass das Produkt keine replikation kompetenten Viren enthält. Dadurch wird das Risiko von Sekundär tumoren und anderen potenziellen Sicherheits problemen für Patienten, die die Behandlung erhalten, verringert.