Nachweis von Adventious Agents in biologischen Produkten

Zu den Kont amina nten von Advent ials in Saatgut beständen, Zell substraten und Rohstoffen, die bei der Herstellung biologischer Produkte verwendet werden, gehören Bakterien, Pilze, Mykoplasmen, Myko bakterien und Viren. Eine wirksame Entfernung oder Kontrolle dieser Mittel wird durch unspezifische und spezifische Techniken erreicht.

• Nicht spezifische Methoden bieten im Allgemeinen einen breiten Detektion bereich, weisen jedoch manchmal Einschränkungen in Bezug auf die Empfindlichkeit und potenzielle wirts bezogene Erkennungs probleme wie Tier-und Kultur tests auf.

• Spezifische Methoden zielen auf bestimmte Krankheits erreger ab, wie z. B. die PCR für genetische Sequenzen. Während die PCR eine hohe Empfindlichkeit aufweist, ist ihre Einschränkung die Unfähigkeit, Primer für unbekannte Sequenzen zu entwerfen.

Um eine maximale biologische Sicherheit zu gewährleisten, ist es wichtig, einen umfassenden Ansatz zu verfolgen, der eine angemessene Beschaffung und Qualitäts kontrolle von Roh-und Ausgangs materialien sowie die Einhaltung guter Herstellungs praktiken (GMP) umfasst. Grundsätze (einschl ießlich Umwelt-und Personal überwachung und Prozess validierung) sowie strenge Tests zur Überprüfung. Die folgenden Methoden werden im Allgemeinen zur Erkennung von Advent iv agenten verwendet:

1. In Vivo-Tests:

1) Verwendung von embryo nierten Hühnereiern oder Tieren zum Testen.

2. In-vitro-Tests:

1) Kultur methode:

• Unter Verwendung verschiedener Medien oder Agar.

2) PCR-Methoden:

• Zur spezies spezifischen Virus detektion.

3) Biochemische Methoden:

• Assays wie der PERT für die reverse Transkript ase.

4) Gen sequenz ierung:

• Für unspezifische virale oder Bakterien gen sequenzen.

5) Infektions tests:

• Indikator zellen assays für verschiedene Arten von replikation kompetenten Viren.

6) Transmission elektronen mikroskopie (TEM):

• Zur morpho logischen Beobachtung.

Die Nachweis methoden für Advent iv mittel variieren je nach Bio verarbeitung stufe, Proben typ und Ziel mikro organismus. Die Verwendung geeigneter Instrumente und Reagenzien gewähr leistet eine zuverlässige und empfindliche Erkennung auch bei geringen Kontamination niveaus. Es gibt keine universelle Methode zur Erkennung von Adventious-Agenten, aber die Auswahl der richtigen Techniken aus der Liste unten kann Ihnen helfen, die für Ihre Bedürfnisse am besten geeigneten Methoden zu finden.

1. genomische Detektion:

• Mithilfe der Hochdurchsatz-Sequenz ierung zur umfassenden Sequenz ierung von DNA in biologischen Produkten und zum Vergleich mit Datenbanken zur Identifizierung potenzieller Krankheits erreger oder anderer exogener DNA.

2. Proteo mische Detektion:

• Verwendung von Massen spektrometrie zur Analyse von Proteinen in biologischen Produkten und zur Identifizierung potenzieller exogener Proteine.

3. Immuno logische Erkennung:

• Verwendung von Antikörper-oder Immunantwort tests zum Nachweis spezifischer Komponenten in biologischen Produkten und Identifizierung potenzieller exogener Bakterien, Viren oder anderer schädlicher Substanzen.

4. mikrobiologie detektion:

• Verwendung von Kultur methoden zur Isolierung und Identifizierung von Mikro organismen und zum Nachweis potenzieller Krankheits erreger.

5. Molekulare Detektion:

• Verwendung der PCR zum Nachweis von DNAs in biologischen Produkten und zur Identifizierung der exogenen Ziel mikro organismen.

Die PCR-basierte Methode ist die häufigste molekular basierte Technik zum empfindlichen und schnellen Nachweis oder zur Quant ifizierung mikrobieller Kontamination. Durch die gezielte Ausrichtung auf bestimmte DNA-Sequenzen ermöglicht es den Nachweis einiger spezifischer Arten, die in vitro schwer zu kultivieren sind oder eine lange Kultivierung szeit erfordern, z. Der Nachweis von Mykoplasmen spezies durch qPCR ist für schnelle QC-Tests zur Unterstützung der Zell-und Gentherapie-Herstellung unerlässlich.

10 KBE Mycoplasma qPCR Amplifi kation Plot